產(chǎn)品概述
表皮生長(zhǎng)因子是一個(gè)由53個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的分子量為6kDa無(wú)糖原基化的蛋白質(zhì)。它源于150~170kDa的I 型跨膜前體蛋白。小鼠前體蛋白的前身由1217個(gè)氨基酸組成,其中有28個(gè)信號(hào)蛋白,1010個(gè)位于細(xì)胞外圍,20個(gè)跨膜區(qū),159個(gè)位于細(xì)胞質(zhì)。具有活性的成熟EGF僅由蛋白酶從很多最接近EGF的隔膜水解而來(lái)。小鼠EGF與人、大鼠和豬的EGF在氨基酸序列水平上分別由70%,73%和74%的同源性。
產(chǎn)品原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法。抗小鼠EGF單抗包被于酶標(biāo)板上,同時(shí)加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和生物素化的抗小鼠EGF抗體,標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品中的EGF會(huì)與加入于孔中的生物素化的抗小鼠EGF抗體及包被于酶標(biāo)板上的單抗結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去;加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親合素,親合素與生物素特異性結(jié)合,游離的成分被洗去。加入顯色底物(顯色劑),若反應(yīng)孔中有EGF,辣根過(guò)氧化物酶會(huì)使無(wú)色的顯色劑變藍(lán),加終止液變黃。在450nm處測(cè)OD值,EGF濃度與OD450值之間呈正相關(guān),可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中EGF濃度。