產(chǎn)品概述
NGF最初是以7S復(fù)合體的形式從小鼠下頜下腺分離得到,該復(fù)合體由共價(jià)相連的三個亞基α、β和γ組成。其中,α 和γ亞基均是激肽釋放酶基因家族(絲氨酸蛋白酶)中的成員;β亞基,也稱為?β-NGF或2.5S NGF,具備NGF所有的生物學(xué)功能。人的重組β-NGF是由兩個120個氨基酸的多肽構(gòu)成的同型二聚體。在氨基酸水平,人的β-NGF蛋白與小鼠、大鼠均有近90%的同源性,并且具有跨物種功能。 NGF是一個典型的嗜神經(jīng)性蛋白,在外周神經(jīng)系統(tǒng)中交感神經(jīng)和部分感覺神經(jīng)元的發(fā)育中發(fā)揮重要作用。此外,在中樞神經(jīng)系統(tǒng),NGF可作為基底前腦膽堿能神經(jīng)元的營養(yǎng)因子。NGF對于非神經(jīng)元組織也具有一定生物學(xué)功效。
產(chǎn)品原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法??谷甩?NGF單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的β-NGF會與單抗結(jié)合形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去;加入生物素化的抗人β-NGF抗體,生物素化抗人β-NGF抗體與酶標(biāo)板上結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)品或樣本中的β-NGF結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去;加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素,親合素與生物素特異性結(jié)合,游離的成分被洗去。加入顯色底物(顯色劑),若反應(yīng)孔中有β-NGF,辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑變藍(lán),加終止液變黃。在450nm處測OD值, β-NGF濃度與OD450值之間呈正相關(guān),可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中β-NGF濃度。